Quels sont les conseils d'utilisation de la nitrocellulose ?

Le nitrate de cellulose est un polymère blanc. Cette substance a en fait de nombreux noms, comme le nitrate de cellulose, et son abréviation anglaise est NC. Cette substance chimique a de nombreuses caractéristiques, comme le fait qu'elle change facilement de couleur après avoir été exposée au soleil et qu'elle est également facile à brûler. Par conséquent, le nitrate de cellulose est en fait une substance dangereuse. Vous devez être prudent lorsque vous l'utilisez. Ce qui suit vous présentera l'utilisation correcte du nitrate de cellulose.

Conseils d'application pour la membrane de nitrocellulose :

1. Principe de la liaison protéine-membrane

Le principe de liaison entre la protéine et la membrane, les forces de liaison connues incluent la force hydrophobe, la force électrostatique de liaison H, etc. Le principe de liaison exact n'est pas clair et est principalement soutenu par des hypothèses. Il existe deux hypothèses principales :

1) Tout d’abord, les deux sont combinés par résistance électrostatique, puis s’appuient sur des liaisons H et des effets hydrophobes pour maintenir la combinaison à long terme.

2) Tout d’abord, les deux sont combinés par interaction hydrophobe, puis l’effet électrostatique est utilisé pour maintenir la combinaison à long terme.

Les deux hypothèses indiquent que le processus de liaison se déroule en deux étapes : d'abord la liaison, puis la liaison à long terme. En raison de l'ambiguïté du principe de liaison, les travaux dans ce domaine s'appuient largement sur l'expérience pratique.

2. Effet de la membrane sur la liaison

1) Taille des pores de la membrane

Certains techniciens ont tendance à utiliser la taille des pores de la membrane pour distinguer les différentes membranes, mais veuillez noter que cela se limite aux produits du même fabricant. S'il s'agit de produits de fabricants différents, cette comparaison n'a aucun sens. La relation entre la taille des pores de la membrane et la vitesse de chromatographie a été décrite ci-dessus.

À mesure que la taille des pores de la membrane diminue, la surface réellement disponible de la membrane augmente et la quantité de protéines liées à la membrane augmente également. Le paramètre permettant d'estimer la surface est le rapport de surface (le rapport entre la surface réellement disponible et la surface membranaire utilisée).

De plus, plus la taille des pores de la membrane est petite, plus la vitesse de chromatographie est lente, plus le temps nécessaire au complexe marqué à l'or pour traverser la ligne T est long et plus la réaction est complète.

En combinant les deux points ci-dessus, la conclusion est que plus la taille des pores de la membrane est petite, plus la sensibilité est élevée. Mais en même temps, cela ralentit également la vitesse de défilement de la plaque et augmente le risque de liaison non spécifique, c'est-à-dire que plus le taux de faux positifs est élevé. Par conséquent, il est nécessaire de sélectionner la membrane adaptée au projet réel en fonction des résultats des tests et de trouver le bon équilibre.

2) Différences entre les membranes des différents fabricants

Cette différence vient principalement de deux points :

1> Lors de la production de membranes, les sources, les types et les quantités de polymères et de tensioactifs utilisés sont différents. De même, ces deux types de substances ont généralement un impact plus important sur les performances du traitement des membranes.

2>Le processus de traitement est différent.

3. Matières premières biologiques, réactifs et formulations de solutions tampons

1) Matières premières biologiques. L'utilisation de matières premières biologiques pour les lignes CT varie, c'est pourquoi seule une brève description est donnée ici.

Premièrement, les anticorps monoclonaux se lient mieux aux membranes que les anticorps polyclonaux, principalement parce que les anticorps polyclonaux ont de nombreux sites de surface différents et que les conditions de liaison optimales pour chaque site à la membrane sont légèrement différentes, ce qui augmente sans aucun doute la difficulté de l'optimisation.

Deuxièmement, plus le poids moléculaire est élevé, plus il est difficile pour la protéine de se lier au matériau de la phase solide.

2) Tampon

Ce qui préoccupe le plus tout le monde est probablement le désir d’obtenir une formule avec d’excellentes performances, y compris des formules de tampon, de solution de blocage et d’autres solutions de traitement.

En fait, il est impossible de fournir une liste de formules universelles. En effet, différents systèmes de réaction nécessitent des formules différentes pour être pris en charge et les systèmes de réaction des différentes institutions sont différents. Si vous voulez attraper du « poisson », vous devez d'abord apprendre à « pêcher ». Afin de ne pas induire tout le monde en erreur, les questions suivantes impliquant des formules ne fournissent que des idées, et veuillez explorer vous-même la formule spécifique.

La composition du tampon est généralement la suivante : PBS (ou autre système tampon) + substance active (pour un problème spécifique) + ajustement du pH. Après avoir consulté divers documents précédents, mon avis personnel est que le principe de la formule doit être simple plutôt que compliqué et que la substance active doit être ajoutée en fonction de vos besoins. De nombreuses substances actives d'origine qui doivent être ajoutées ne sont plus nécessaires en raison de l'amélioration de la technologie de fabrication des membranes.

Le système tampon recommandé est le PBS 0,01 M pH 7-7,2, qui présente une bonne adaptabilité à une variété d'antigènes et d'anticorps.

Voici les principaux facteurs qui affectent la performance de la substance :

Une petite quantité de NACL peut réduire la force du signal et éliminer les faux positifs.

L'alcool organique (méthanol, isopropanol, etc.) mouille la membrane, réduit l'électricité statique sur la membrane et facilite la liaison du revêtement. Personnellement, je ne le recommande pas car le processus de fabrication de la membrane a été amélioré.

Les tensioactifs (TW20, TX100) peuvent augmenter l'hydrophilie, éviter les lignes creuses et améliorer la couleur.

Le sucre, un agent protecteur, ralentit le processus de vieillissement et peut également augmenter l’hydrophilie comme ci-dessus.

Le réglage du pH à une certaine position peut éliminer les faux positifs.

4. Exemple d'environnement

L'humidité ambiante est très importante pour le processus de dépôt de film. L'humidité optimale se situe généralement entre 45 et 65 %.

Lorsque l'humidité est trop faible, la charge statique s'accumule facilement sur la membrane et des points dispersés se forment facilement sur la membrane, ce qui entraîne des taches hydrophobes dans le test.

Lorsque l'humidité est trop élevée, l'action capillaire sur la membrane est renforcée et le film est susceptible de provoquer un élargissement ou même une diffusion de la ligne CT.

Afin d'assurer l'uniformité de l'humidité de la membrane lors du repérage de l'échantillon, la membrane est généralement placée dans des conditions d'humidité pendant un certain temps avant le repérage de l'échantillon.

5. Relation entre l'instrument de repérage et l'état de surface de la membrane

Il existe actuellement deux méthodes de repérage : le type de film à gratter et le type de film à gratter sans contact. Le type de film à gratter sans contact est meilleur que le type de film à gratter, et le type de film à gratter importé est meilleur que le type de film à gratter national.

Étant donné que la méthode de grattage de membrane utilise un tube souple pour attirer l'anticorps sur la surface de la membrane, et que la membrane elle-même est molle et cassante, le tube à gratter laissera des marques sur sa surface. Les machines de grattage de membrane importées utilisent de meilleurs matériaux et systèmes de contrôle, de sorte que les rayures laissées sont plus légères, tandis que les instruments nationaux sont de qualité inférieure, de sorte que les rayures laissées sont plus graves. Les rayures peuvent facilement former une résistance au complexe marqué à l'or de la chromatographie, ce qui entraîne des faux positifs. En même temps, il est facile d'avoir un phénomène étrange selon lequel une fine ligne (ligne fantôme) apparaît à la position de la ligne T lors de l'exécution de la plaque, et la ligne fantôme disparaît une fois l'exécution de la plaque terminée.

6. Largeur de la membrane et position du spotting

La largeur de la membrane est généralement de 18 mm (ou 20 mm) et 25 mm, qui sont utilisées respectivement pour les bandelettes de test et les plaques de test.

Cependant, différentes positions de repérage de la ligne T entraîneront différentes sensibilités. Lorsque la position de repérage se déplace vers le haut, la vitesse du complexe marqué à l'or passant par la position de la ligne T ralentit, le temps de réaction augmente et la sensibilité augmente. Inversement, la sensibilité diminue. Cette méthode peut être utilisée pour modifier la sensibilité et éliminer les faux positifs.