Quelle est la formule du milieu de congélation des cellules ?

Avec le développement continu de la science et de la technologie, la technologie médicale s’améliore également constamment. Il y a quelques années, l'incident de la congélation d'êtres humains a ouvert les yeux du monde. Il s'avère que non seulement les aliments peuvent être congelés et conservés, mais aussi le corps humain. Si vous souhaitez atteindre cet objectif, vous avez besoin d'un liquide de refroidissement cellulaire. Comment configurer cette chose ? Regardons de plus près quelle est la formule du liquide de congélation cellulaire ?

(I) Cryoconservation cellulaire

1. Préparez un milieu de culture de congélation contenant 10 % de DMSO ou de glycérol et 10 à 20 % de sérum de veau ;

2. Prenez les cellules en phase de croissance logarithmique, retirez l'ancien milieu de culture et lavez avec du PBS.

3. Retirez le PBS et ajoutez la quantité appropriée de trypsine (recouvrant la surface de la boîte de culture) pour digérer la monocouche de cellules ;

4. Centrifuger à 1000 tr/min pendant 5 min ;

5. Retirer la trypsine, ajouter une quantité appropriée de milieu de culture de congélation préparé, souffler doucement avec une pipette pour uniformiser les cellules, compter et ajuster la densité finale des cellules dans le milieu de congélation à 5×106/ml～1×107/ml ;

6. Distribuer les cellules dans des tubes de cryoconservation, 1 à 1,5 ml par tube ;

7. Indiquez le nom de la cellule, le temps de congélation et l’opérateur sur le tube de cryoconservation ;

8. Cryoconservation : La procédure de cryoconservation standard est une vitesse de refroidissement de -1 à -2°C/min. Lorsque la température descend en dessous de -25°C, elle peut être augmentée à -5°C à -10°C/min. Lorsqu'elle atteint -100°C, elle peut être rapidement immergée dans l'azote liquide. Alternativement, les cryotubes contenant des cellules peuvent être placés dans un réfrigérateur à -20°C pendant 2 heures, puis placés dans un réfrigérateur à -70°C pendant la nuit, les cryotubes peuvent être retirés et placés dans un récipient à azote liquide.

(II) Récupération cellulaire

1. Retirez le cryovial du récipient d'azote liquide et plongez-le directement dans de l'eau tiède à 37℃, en le secouant de temps en temps pour le faire fondre le plus rapidement possible.

2. Retirez le cryotube du bain-marie à 37℃, ouvrez le couvercle, aspirez la suspension cellulaire avec une pipette, ajoutez-la au tube à centrifuger et ajoutez 10 fois plus de milieu de culture, mélangez bien ;

3. Centrifugeuse, 1000 tr/min, 5 min ;

4. Jeter le surnageant, ajouter du milieu de culture contenant 10 % de sérum de veau pour remettre les cellules en suspension, compter, ajuster la densité cellulaire, inoculer le flacon de culture et cultiver dans un incubateur à 37 °C ;

5. Remplacez le milieu de culture le lendemain et poursuivez la culture.

Précautions

1. Les cellules cultivées depuis le stade de prolifération jusqu'à la formation d'une monocouche dense peuvent être utilisées pour la cryoconservation, mais les cellules en phase de croissance logarithmique sont préférées. Il est préférable de changer le milieu de culture une fois par jour avant la congélation ;

2. Lorsque vous placez le cryotube dans le récipient d'azote liquide ou que vous le retirez du récipient, prenez des mesures de protection pour éviter les gelures ;

3. Il est préférable d’utiliser un milieu de culture fraîchement préparé pour la congélation et la décongélation.