Qu'est-ce que l'acétyl glucosaminidase

L'acétyl glucosaminidase est un marqueur sensible pour détecter les lésions rénales et les tubules rénaux. Il peut également être utilisé pour vérifier les infections des voies urinaires et pour établir un diagnostic précoce de la néphropathie diabétique. Son importance clinique apparaît généralement dans des conditions pathologiques. Si les autres tests sont normaux et que le taux d'acétyl glucosidase est élevé, un régime pauvre en sel, pauvre en graisses et riche en vitamines et l'arrêt du tabac et de l'alcool sont recommandés. Ensuite, examinons de plus près le rôle de l’acétyl glucosamidase, à quoi nous devons prêter attention et comment le vérifier.

Valeurs normales du test de β-N-acétylglucosaminidase

1. Méthode colorimétrique au p-nitrophénol : NAG sérique 21,54±6,4U/L, le NAG urinaire a montré une distribution normale, la médiane était de 9,13U/g de créatinine et la limite supérieure du 95e percentile était de 16,10U/g de créatinine.

2. Spectrophotométrie de fluorescence :

Sérum adulte : 9,94±2,07U/L.

Urines adultes : 6,39±3,19U/LCre.

Le rôle du test de la β-N-acétylglucosaminidase

Les mesures de l'activité NAG dans le sang et l'urine sont plus sensibles aux lésions parenchymateuses rénales, en particulier aux lésions aiguës et aux lésions actives, et sont principalement utilisées pour surveiller les lésions rénales précoces et l'observation des maladies.

1. Maladie tubulaire rénale Les métaux lourds (mercure, plomb, cadmium, etc.) et les lésions rénales induites par les médicaments, l'ischémie, l'hypoxie, la perte de sang, le choc, etc. peuvent tous provoquer une augmentation de l'activité NAG.

2. Chez les patients atteints du syndrome néphrotique, le NAG urinaire augmente souvent de manière significative, diminue pendant la rémission et augmente rapidement pendant la rechute, il peut donc être utilisé comme indication pour l'observation clinique. Les changements dans la phase aiguë de la glomérulonéphrite sont importants, mais comparés à ceux d'une lésion tubulaire, les changements sont plus faibles.

3. Diagnostic de localisation de l'infection des voies urinaires : une concentration urinaire élevée de NAG dans la pyélonéphrite aiguë et chronique peut la distinguer d'une simple cystite. Il peut être utilisé pour le diagnostic précoce d’une infection des voies urinaires supérieures.

4. Surveillance du rejet de greffe rénale : le NAG peut être élevé dans les premiers stades du rejet de greffe rénale et est plus sensible que les protéines urinaires, la créatinine sérique et la clairance de la créatinine.

5. Diagnostic précoce de la néphropathie diabétique : un taux élevé de NAG urinaire dans la néphropathie diabétique est meilleur que l'albumine urinaire et la β2-microglobuline pour un diagnostic précoce de la maladie.

Maladies possibles avec des résultats élevés de β-N-acétylglucosaminidase : syndrome néphrotique, infection des voies urinaires

À quoi faut-il faire attention lors du test de β-N-acétylglucosaminidase

(1) Méthode colorimétrique au p-nitrophénol :

① La matrice p-nitrophénol doit être purifiée et séchée à 50℃ pendant 24h avant préparation. Utilisez 10 mmol/L de NaOH pour obtenir une concentration de 0,04 mmol/L et scannez la courbe d'absorption avec un spectrophotomètre à bande passante étroite, λmax = 401 nm, selon les normes IFCC, Aλmax = 0,7316 ～ 0,7388, Eλmax = 18380 ± 90 (25 ℃).

② Le substrat a une faible solubilité. Lors de la préparation, il doit d'abord être ajusté en une pâte avec une quantité appropriée de tampon pH 4,6, puis le tampon doit être progressivement ajouté à la quantité requise.

③ Lorsque le résultat de la mesure dépasse la plage linéaire, l'échantillon doit être dilué avec une solution saline physiologique et remesuré, et le résultat doit être multiplié par le facteur de dilution.

④ La concentration de l'enzyme urée est grandement affectée par le volume d'urine, le volume d'urine sur 24 heures doit donc être collecté. Si le taux d’excrétion enzymatique est calculé à l’aide du rapport NAG/g de créatinine, il ne sera pas affecté par la concentration ou la dilution de l’urine, et il n’est pas nécessaire de retenir l’urine pendant 24 heures.

(2) Spectrophotométrie de fluorescence :

① Il existe un kit de test produit localement pour mesurer le NAG par la méthode de fluorescence, qui est très sensible et n'est pas affecté par la couleur de l'urine.

②Vous pouvez également utiliser le photomètre à fluorescence 930 produit par Shanghai Third Analytical Instrument Factory, avec un filtre d'excitation de 360 ​​et un filtre d'émission de composite (400+450), avec des résultats satisfaisants.

③ La concentration de chaque composant dans la solution de réaction enzymatique de cette méthode est : substrat 1,33 mmol/L, acide citrique 20 mmol/L, Na2HPO4 32 mmol/L.

④ Le solvant utilisé pour la préparation des réactifs doit être de l'eau bidistillée, le substrat ne doit contenir aucun 4-MU libre et l'enzyme doit être absente dans la BSA ou inactivée par chauffage à 50°C pendant 2 heures.

⑤ Le NAG dans le sérum est stable à 4°C pendant plusieurs heures à plusieurs jours et à -20°C pendant plusieurs mois. Les échantillons d'urine sont stables à 4°C pendant 1 semaine et peuvent également être traités avec du plasma anticoagulé au citrate.

6 La β-N-acétylglucosamine peut être hydrolysée par deux enzymes, l'une est la β-N-acétylglucosamine sidase (EC 3.2.1.30) et l'autre est la β-N-acétylglucosidase (EC 3.2.1.52). Seule l'enzyme purifiée peut être limitée à l'EC 3.2.1.30 ou à l'EC 3.2.1.52. À proprement parler, le NAG, auquel on fait souvent référence dans la littérature nationale, est nommé d'après le substrat utilisé, plutôt que de faire référence à la spécificité de l'enzyme pour le substrat. C'est pourquoi la littérature étrangère l'appelle souvent β-N-acétylglucosaminidase.

Méthodes de test de la β-N-acétylglucosaminidase

(1) Méthode colorimétrique au p-nitrophénol : mélanger le mélange à une longueur d'onde de 405 nm, un trajet lumineux de 1 cm et ajuster la lumière à zéro avec de l'eau distillée. Lire l'absorbance de chaque tube et utiliser la différence (AU - AC) pour vérifier la courbe standard.

① La matrice p-nitrophénol doit être purifiée et séchée à 50℃ pendant 24h avant préparation. Utilisez 10 mmol/L de NaOH pour obtenir une concentration de 0,04 mmol/L et scannez la courbe d'absorption avec un spectrophotomètre à bande passante étroite, λmax = 401 nm, selon les normes IFCC, Aλmax = 0,7316 ～ 0,7388, Eλmax = 18380 ± 90 (25 ℃). Selon le coefficient d'absorption molaire du p-nitrophénol

② Le substrat a une faible solubilité. Lors de la préparation, il doit d'abord être ajusté en une pâte avec une quantité appropriée de tampon pH 4,6, puis le tampon doit être progressivement ajouté à la quantité requise.

③ Lorsque le résultat de la mesure dépasse la plage linéaire, l'échantillon doit être dilué avec une solution saline physiologique et remesuré, et le résultat doit être multiplié par le facteur de dilution.

④ La concentration de l’enzyme urée est grandement affectée par le volume d’urine, le volume d’urine sur 24 heures doit donc être collecté. Si le taux d’excrétion enzymatique est calculé à l’aide du rapport NAG/g de créatinine, il ne sera pas affecté par la concentration ou la dilution de l’urine, et il n’est pas nécessaire de retenir l’urine pendant 24 heures.

(2) Spectrophotométrie de fluorescence : Tout d’abord, diluez le sérum ou l’urine 20 fois avec une solution tampon ne contenant pas d’albumine sérique bovine (BSA).

Bien mélanger, régler la longueur d'onde d'excitation à 364 nm, la longueur d'onde d'émission à 448 nm, ajuster à zéro avec la solution d'arrêt, ajuster l'intensité de fluorescence du tube 4-MU de 6 μmol/L à 100, puis mesurer respectivement l'intensité de fluorescence du tube vierge et du tube de mesure.

① Il existe un kit de test produit localement pour mesurer le NAG par la méthode de fluorescence, qui est très sensible et n'est pas affecté par la couleur de l'urine.

②Vous pouvez également utiliser le photomètre à fluorescence 930 produit par Shanghai Third Analytical Instrument Factory, avec un filtre d'excitation de 360 ​​et un filtre d'émission de composite (400+450), avec des résultats satisfaisants.

③ La concentration de chaque composant dans la solution de réaction enzymatique de cette méthode est : substrat 1,33 mmol/L, acide citrique 20 mmol/L, Na2HPO4 32 mmol/L.

④ Le solvant utilisé pour la préparation des réactifs doit être de l'eau bidistillée, le substrat ne doit contenir aucun 4-MU libre et l'enzyme doit être absente dans la BSA ou inactivée par chauffage à 50°C pendant 2 heures.

⑤ Le NAG dans le sérum est stable à 4°C pendant plusieurs heures à plusieurs jours et à -20°C pendant plusieurs mois. Les échantillons d'urine sont stables à 4°C pendant 1 semaine et peuvent également être traités avec du plasma anticoagulé au citrate.

6 La β-N-acétylglucosamine peut être hydrolysée par deux enzymes, l'une est la β-N-acétylglucosamine sidase (EC 3.2.1.30) et l'autre est la β-N-acétylglucosidase (EC 3.2.1.52). Seule l'enzyme purifiée peut être limitée à l'EC 3.2.1.30 ou à l'EC 3.2.1.52. À proprement parler, le NAG, auquel on fait souvent référence dans la littérature nationale, est nommé d'après le substrat utilisé, plutôt que de faire référence à la spécificité de l'enzyme pour le substrat. C'est pourquoi la littérature étrangère l'appelle souvent β-N-acétylglucosaminidase.

Combien coûte le test de β-N-acétylglucosaminidase ?

Catégorie de spécialité : Urologie Catégorie d'examen : Examen biochimique

Sexe applicable : Convient aussi bien aux hommes qu'aux femmes Jeûne : Jeûne

Prix ​​de référence du test β-N-acétylglucosaminidase : 10-60 yuans