Dans quels domaines la détection PCR est-elle appliquée

La biologie moléculaire est considérée comme une technologie de pointe dans le domaine actuel de la recherche médicale, et la technologie de détection 44PCR en fait partie, largement utilisée en médecine clinique. La technologie de détection 44PCR est principalement utilisée pour analyser les séquences génétiques et détecter l'apparition de tumeurs, de cellules cancéreuses et de maladies génétiques. Ses caractéristiques sont qu'il peut détecter des gènes mutés dans un court laps de temps, peut également retracer des organisations génétiques complexes et est facile à combiner avec d'autres méthodes de test génétique, il est donc largement utilisé dans le domaine de la recherche médicale.

Application de la PCR à la détection de mutations génétiques :

1. Détection par PCR directe des mutations ponctuelles

1. Détection directe des délétions par PCR :

En cas de délétion d'un gène, une paire d'amorces peut être conçue de chaque côté du fragment supprimé en utilisant la séquence d'ADN connue du gène. Une PCR est ensuite réalisée et le produit est soumis à une électrophorèse sur gel d'agarose et coloré au bromure d'éthidium. La présence de produits d'amplification spécifiques est détectée sous un détecteur ultraviolet. Cela permet de déterminer très facilement s'il manque un fragment d'ADN dans l'échantillon à tester.

1. Détection de la délétion à l'aide d'une PCR à deux amorces. Si la séquence d'ADN d'un gène est claire et que le site de délétion est relativement fixe, une paire d'amorces appropriées peut être synthétisée des deux côtés du fragment de délétion en fonction de la séquence d'ADN de la région de délétion pour la PCR. Ensuite, une électrophorèse sur gel d'agarose et une coloration au bromure d'éthidium sont réalisées, et la présence de fragments amplifiés spécifiques est observée sous une lumière ultraviolette à ondes courtes. Cette méthode est le moyen le plus rapide de détecter les délétions de fragments de gènes.

2. La détection par PCR multiplex avec plusieurs paires d'amorces est manquante.

3. Détection de la perte d’hétérozygotie à l’aide de la technologie PCR.

2. Détection directe de la PCR par déplacement alcalin unique

1. Détection directe des changements dans les sites de clivage des endonucléases de restriction - Analyse enzymatique des produits PCR.

2. PCR 3'-spécifique, système de mutation bloquant l'amplification et PCR spécifique à l'allèle.

3. 3. Séquençage direct par PCR.

4. Hybridation par points de sonde oligonucléotidique PCR (PCR-ASb).

2. Dépistage rapide des gènes mutants à l'aide de la technologie PCR

Les méthodes mentionnées ci-dessus peuvent détecter directement le site de mutation, et la condition préalable est que la nature et l'emplacement de la mutation soient clairs. Cependant, dans de nombreux cas, le site de la mutation génétique n'est pas fixe et la nature n'est pas très claire. Par conséquent, des méthodes de dépistage rapides et simples sont nécessaires pour déterminer s'il existe une mutation génétique dans l'échantillon. Ces dernières années, la technologie de dépistage rapide des mutations basée sur la technologie PCR a été largement utilisée dans la détection des mutations génétiques dans les tumeurs et les maladies génétiques.

1. Polymorphisme de conformation monocaténaire par PCR

(ii) Détection de mutations génétiques par électrophorèse sur gel à gradient dénaturant (DGGE), électrophorèse sur gel à température constante (CGGE) et température (TGGE).

En résumé, il existe de nombreuses technologies de détection des mutations génétiques basées sur la technologie PCR, et chacune présente ses propres avantages et inconvénients, mais les plus utilisées sont la PCR-SSCP, la PCR-ASO et le séquençage direct par cycle PCR. Avec l'émergence continue de nouvelles méthodes, la recherche sur les mutations génétiques sera grandement favorisée.