Un cas positif à Zhengzhou a été testé négatif à l'acide nucléique pendant 12 fois consécutives. Combien de tests d’acide nucléique faut-il effectuer pour garantir la tranquillité d’esprit ?

Récemment, un cas positif a été découvert à Zhengzhou après que 12 résultats consécutifs de tests d'acide nucléique se soient révélés négatifs après 9 jours d'isolement. Pourquoi certaines personnes passent-elles à travers les mailles du filet des tests d’acide nucléique ? Combien de fois devons-nous faire des tests pour nous sentir à l’aise ?

Interview d'experts :

Zhang Yongxiang (médecin-chef du service respiratoire de l'hôpital populaire du district de Daxing à Pékin)

Le 16 novembre à 20h00, une conférence de presse sur la prévention et le contrôle de l'épidémie de pneumonie à nouveau coronavirus à Zhengzhou, province du Henan, a rapporté qu'un total de 53 cas confirmés ont été signalés dans cette vague d'épidémie. Parmi eux, le cas n°53, nouvellement ajouté le 14 novembre, a été découvert après 9 jours d'isolement centralisé. Avant cela, 12 tests d'acide nucléique consécutifs avaient été effectués depuis le 3 novembre, et les résultats étaient tous négatifs.

Ce cas prouve également une fois de plus qu’un petit nombre de personnes infectées ont une longue période d’incubation et que la prévention et le contrôle de l’épidémie ne peuvent être pris à la légère. Pourquoi certaines personnes passent-elles à travers les mailles du filet des tests d’acide nucléique ? Combien de fois devons-nous faire des tests pour nous sentir à l’aise ?

Comment déterminer un test d’acide nucléique positif ?

Il a fallu 12 tests d’acide nucléique pour obtenir un résultat positif. Se pourrait-il que cette technologie capable de faire « apparaître » le nouveau coronavirus ait réellement échoué ? Bien sûr que non!

Wang Guiqiang, président de la branche des maladies infectieuses de l'Association médicale chinoise et directeur du département des maladies infectieuses du premier hôpital de l'université de Pékin, a déclaré dans une interview aux médias que la stabilité des tests d'acide nucléique eux-mêmes était bonne. Les situations dites indétectables ou faussement négatives ou faussement positives se produisent principalement parce que toute méthode de détection présente un problème de sensibilité. Étant donné qu’il existe des différences dans les principes et les pratiques des tests d’acide nucléique pour le nouveau coronavirus, il existe un risque de « tests inexacts ».

Zhang Yongxiang, médecin-chef du département respiratoire de l'hôpital populaire du district de Daxing à Pékin, a déclaré aux journalistes que le nouveau coronavirus, comme le coronavirus du SRAS, est composé d'ARN (acide ribonucléique), de protéines, etc., et que la couche la plus externe est composée de lipides et de glycoprotéines. L'ARN est facilement dégradé (destruction de certains fragments et chaînes d'ARN individuels dans la cellule), et la capside protéique enveloppe l'ARN à l'intérieur, le protégeant avec l'enveloppe. Le nouveau coronavirus envahit les cellules via des récepteurs situés à la surface de cellules spécifiques, provoquant une infection, et utilise les cellules infectées pour se répliquer et proliférer.

▲Photo du nouveau coronavirus au microscope (image provenant d'Internet)

Par conséquent, les professionnels de la santé peuvent collecter des échantillons de cellules provenant de parties spécifiques du corps humain et tester s’ils contiennent de l’ARN viral pour confirmer si le corps est infecté.

L'acide nucléique de l'ARN est composé de quatre bases différentes. Si les quatre bases doivent être disposées par paires, il y aura huit formes. Il existe 256 façons d’organiser les bases sur quatre sites connectés. Plus l’ARN contient de bases, plus la combinaison est complexe. Le nouveau coronavirus possède des dizaines de milliers de bases. L’acide nucléique du virus est comme notre carte d’identité, c’est-à-dire son identité unique. Le but des tests d’acide nucléique est d’identifier « l’identité » du nouveau coronavirus.

Prenons l’exemple de la technologie PT-PCR actuellement couramment utilisée : supposons qu’une personne ait été infectée par le COVID-19 et doive être examinée. Le personnel médical collectera les cellules porteuses du virus, les transportera au laboratoire, les inactivera complètement, détruira leur structure d'origine, exposera l'acide nucléique, puis utilisera la sonde dans le réactif pour voir si elle peut être parfaitement adaptée à certaines parties clés de l'ARN. Chaque correspondance réussie générera un signal fluorescent correspondant, indiquant que la « carte d'identité génétique » a été identifiée, et le détecteur PCR enregistrera la valeur du signal fluorescent en temps réel. Après des vérifications répétées, l'intensité de la fluorescence devient de plus en plus élevée et une courbe ascendante apparaîtra sur le logiciel de détection, indiquant que le test est positif, prouvant que l'échantillon contient l'ARN du nouveau coronavirus.

Qu'est-ce qui cause « l'incertitude » ?

Zhang Yongxiang a déclaré que le test d'acide nucléique viral est l'une des conditions nécessaires pour un diagnostic positif. D’un point de vue technique, les tests d’acide nucléique sont un flux de travail en plusieurs étapes. L'ensemble du test comprend l'échantillonnage, le transport, l'inactivation, l'extraction d'acide nucléique, la réaction PCR, etc. Une utilisation incorrecte ou des problèmes avec les réactifs ou l'équipement à n'importe quelle étape peuvent entraîner des échantillons « faux négatifs » ou « faux positifs ».

Dans le cadre du test d'acide nucléique, s'il y a des problèmes de qualité avec le kit de test d'acide nucléique ou le tube d'échantillonnage, cela entraînera une mesure fondamentalement inexacte ; de plus, si la quantité de solution de conservation du virus extraite est trop faible et que le volume de solution d'élution d'acide nucléique ajouté au système PCR pour le test est trop faible, il y aura un risque de perte d'acide nucléique, ce qui entraînera un écart entre les résultats et la vraie valeur.

Le test d’acide nucléique actuel pour le nouveau coronavirus nécessite un prélèvement de gorge ou un prélèvement nasopharyngé. Le prélèvement correct de l'écouvillon de gorge nécessite d'essuyer simultanément les deux amygdales pharyngées et la paroi postérieure du pharynx. L'écouvillon nasopharyngé doit être inséré doucement dans le passage nasal, rester au niveau du nez et du palais pendant un moment, puis tourner lentement vers l'extérieur. La collecte d'échantillons à partir de ces deux endroits était rarement effectuée dans la pratique clinique dans le passé, de sorte que le personnel d'échantillonnage n'a commencé une formation et un fonctionnement centralisés qu'en 2020. Une formation inadéquate du personnel est vouée à conduire à des opérations incohérentes, qui peuvent également conduire à des résultats de tests d'acide nucléique incohérents pour la même personne à chaque fois.

▲Les testeurs identifient les échantillons collectés en laboratoire (Photo/Visual China)

Des études ont montré que l’échantillon respiratoire présentant le taux de détection le plus élevé est le liquide de lavage bronchoalvéolaire, suivi du tissu pulmonaire, des expectorations aspirées ou de l’aspirat nasopharyngé, puis de l’écouvillon nasopharyngé ou de l’écouvillon de gorge. Par conséquent, bien que le test par écouvillonnage nasopharyngé ou par écouvillonnage de gorge soit pratique et rapide, il ne s’agit pas de la méthode la plus précise. Si l'infection du patient a atteint le stade moyen ou tardif de la maladie, le virus est concentré dans les voies respiratoires inférieures et le nasopharynx n'est plus la principale zone d'infection. L'écouvillon nasopharyngé ou l'écouvillon de gorge peuvent ne pas être précis après des tests répétés.

Zhang Yongxiang a déclaré : « La charge virale peut varier d'une personne à l'autre. Si la charge virale est particulièrement élevée, le temps de détection sera plus court. Si la charge virale est très faible, le résultat peut être plus difficile à obtenir. »

En fait, il n’est pas difficile d’imaginer que pour un même lot d’échantillons testés, leurs séquences génétiques soient amplifiées au même rapport multiple lors de la phase d’amplification du test. Pour les échantillons contenant davantage de séquences de gènes viraux, après amplification, il y aura davantage de gènes viraux. Lorsqu'ils sont testés avec un kit de test, ils peuvent être plus proches de la limite de détection minimale du kit et plus faciles à détecter. Pour les échantillons à faible teneur virale, bien qu'ils soient également amplifiés au même rapport multiple, lorsqu'ils sont testés avec le kit de test, les gènes viraux amplifiés sont bien inférieurs à ceux des échantillons portant davantage de séquences de gènes viraux. En d’autres termes, ce n’est qu’au moyen de multiples tests d’acide nucléique viral que nous pourrons attraper le « poisson glissant » porteur d’acide nucléique viral.

Un patient a subi un jour cinq tests d’acide nucléique consécutifs, dont un seul était positif, les autres étaient négatifs. Après avoir vérifié les antécédents médicaux du patient, le médecin a appris que le patient était porteur du virus de l'immunodéficience humaine (VIH) et qu'il prenait des médicaments anti-VIH depuis longtemps. Le niveau du nouveau coronavirus dans son corps pourrait avoir été inférieur à la limite de détection en raison de l'effet des médicaments, ce qui a entraîné des tests d'acide nucléique négatifs répétés.

En outre, la contamination croisée entre les échantillons ou la contamination par transfert en laboratoire lors des opérations de test du personnel de laboratoire peuvent également conduire à des résultats inexacts. Pour un laboratoire clinique standardisé, il existe des stratégies strictes de contrôle qualité, qui peuvent généralement éviter efficacement les résultats faussement positifs dans la détection d'acide nucléique viral. D’autres facteurs, tels que les changements dans l’état de la maladie, les différentes vitesses de progression de la maladie chez les patients, le moment et les intervalles de temps d’échantillonnage, affecteront également les résultats du test.

Combien de fois faut-il effectuer des tests d’acide nucléique pour être « sûr » ?

Lorsque le journaliste a interrogé des experts, il a appris qu'en raison des nombreux facteurs affectant les tests d'acide nucléique, 1 à 2, voire trois résultats d'acide nucléique négatifs consécutifs ne peuvent pas garantir que la personne testée n'est pas porteuse du nouveau coronavirus. Cependant, pour les contacts non étroits, les résultats du test d'acide nucléique ressemblent davantage à un « laissez-passer » - pour garantir qu'ils peuvent effectuer certaines activités de rassemblement de groupe, donc généralement les tests sont suffisants, et en même temps, ils doivent également faire attention à la protection.

Ainsi, pour les gens ordinaires, il n’est pas nécessaire de procéder à des tests répétés. Des tests répétés sont nécessaires pour les cibles clés. Par exemple, des contacts étroits peuvent excréter une petite quantité de virus au début, et le prélèvement de gorge peut ne pas être détecté, mais cela ne signifie pas qu'il n'y a pas de virus dans le corps. Nous devons donc effectuer plusieurs tests. Un seul test d’acide nucléique négatif n’est en réalité pas sûr pour les cibles clés.

(Photo d'Internet)

Pour les cas suspects ou les contacts étroits, plusieurs tests peuvent être nécessaires si le risque de maladie n’a pas été éliminé. Selon la septième édition du plan de diagnostic et de traitement du nouveau coronavirus, un dépistage par des analyses sanguines de routine, des lésions en verre dépoli sur des tomodensitogrammes pulmonaires et éventuellement des tests de détection d'anticorps spécifiques au nouveau coronavirus (IgG et IgM) sont également nécessaires.

De plus, en raison des différences individuelles, de la tolérance et des antécédents médicaux des différentes personnes, cela aura un certain impact sur l’échantillonnage. Par conséquent, le nombre de fois que le test d’acide nucléique viral doit être effectué dépend de nombreux facteurs d’influence.

Références :

1. Zhang Rui, Li Jinming. Comment réduire les faux négatifs dans les tests d’acide nucléique du nouveau coronavirus[J]. Journal médical chinois, 2020, 100(011) : 801-804.

2. Wang Qian, Wang Jianzhong. Médecine de laboratoire clinique[M]. Pékin : Maison d'édition médicale du peuple, 2015.

3. Li Jin, Ye Guangming, Chen Liangjun et al. Analyse des causes et des contre-mesures des résultats faussement négatifs dans les tests d'acide nucléique du nouveau coronavirus[J]. Journal chinois de médecine de laboratoire, 2020, 43(03) : 221-225.

4. Wang Da, Dong Liang, Qing Song et al. Idées fausses sur les tests d’acide nucléique du nouveau coronavirus[J]. Journal chinois des infections hospitalières, 2020, 30(08):1167-1170.

5. Avis relatif à la publication du diagnostic et du plan de traitement de la pneumonie à nouveau coronavirus (version d'essai 8)

http://www.nhc.gov.cn/xcs/zhengcwj/202008/0a7bdf12bd4b46e5bd28ca7f9a7f5e5a.shtml

6. Avis relatif aux tests d'acide nucléique COVID-19 à l'hôpital universitaire de médecine de Pékin

https://www.pumch.cn/detail/23552.html

Rédigé par les journalistes Song Meng, Lai Tianying et Feng Xiaohong (Groupe médical et de santé)

Rédacteur graphique/Chen Yongjie Rédacteur nouveaux médias/Lv Bingxin

Produit par : Science Central Kitchen

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