Une image au début, tout le contenu dépend de l'éditeur : Application de la routine sanguine en cytométrie de flux

Cytométrie de flux ?

Je n'en avais jamais entendu parler !

Vous en avez entendu parler, mais vous ne savez pas exactement ce que c'est ?

Beaucoup de gens ne le connaissent peut-être pas, mais ce n’est pas grave, regardons d’abord une photo.

Les deux zones rouges sur l’image ci-dessus sont obtenues par cette technologie. Bon, allons droit au but.

La cytométrie de flux est une technique biologique utilisée pour compter et trier de minuscules particules en suspension dans un fluide . Cette technique peut être utilisée pour analyser en continu plusieurs paramètres de cellules individuelles lorsqu'elles passent devant un détecteur optique ou électronique. La cytométrie de flux est une technologie qui détecte les signaux fluorescents de cellules individuelles ou d’autres particules biologiques en suspension pour réaliser une analyse quantitative et un tri à grande vitesse, cellule par cellule. Il présente les caractéristiques d'une forte spécificité, d'une sensibilité élevée, d'une vitesse rapide et peut être analysé et trié. Les signaux de détection de cytométrie de flux sont divisés en deux types : les signaux de lumière diffusée et les signaux fluorescents.

1. Signal lumineux diffusé

Interlude : Lorsqu'un faisceau de lumière monochromatique parallèle brille sur un échantillon liquide, la majeure partie de la lumière traverse la solution et une petite partie de la lumière est diffusée sous différents angles en raison de la collision entre les photons et les molécules du matériau, ce qui modifie la direction du mouvement des photons. Cette lumière est appelée lumière diffusée.

Les signaux lumineux diffusés sont divisés en lumière diffusée vers l'avant et en lumière diffusée latéralement. La première est également appelée lumière diffusée à petit angle et la seconde est également appelée lumière diffusée à 90°.

La diffusion vers l'avant (FSC) est le signal lumineux diffusé collecté dans la direction vers l'avant. D’une manière générale, le FSC peut refléter la taille des cellules. Si le FSC est fort, les cellules sont plus grandes, et vice versa. Cependant, lorsque la cible de détection est constituée de cellules non sphériques (telles que les globules rouges, les spermatozoïdes, etc.), en raison de l'orientation incohérente des cellules dans le système d'écoulement de fluide, il est facile que les FSC du même type de cellules soient très différentes lors de la détection laser. Cela nécessite une attention particulière.

La diffusion latérale (SSC) est le signal lumineux diffusé collecté latéralement. Le SSC est plus sensible à l'indice de réfraction de la membrane cellulaire, du cytoplasme et de la membrane nucléaire, et son intensité est liée à la structure fine et aux propriétés des particules à l'intérieur de la cellule. En général, plus une cellule possède d’organites et de particules, plus son SSC est fort.

En utilisant le test à double paramètre FSC/SSC, plusieurs sous-populations cellulaires peuvent être identifiées à partir d'échantillons sans ajout de colorants fluorescents. La méthode la plus classique consiste à utiliser les paramètres doubles FSC/SSC pour diviser les leucocytes du sang périphérique humain en trois sous-populations : lymphocytes, monocytes et granulocytes (comme indiqué dans la figure ci-dessous). Les lymphocytes ont des FSC et des SSC relativement petits, les monocytes ont des FSC relativement grands et des SSC moyens, et les granulocytes ont des FSC et des SSC relativement grands. (Vous ne connaissez pas ? Les trois catégories sont claires, n'est-ce pas ? En fait, de nombreux nouveaux arrivants ne les comprennent probablement pas car de nombreuses places ont été supprimées.)

2. Signal de fluorescence

Il existe également deux types de signaux fluorescents. L’un est le signal fluorescent émis par la propre fluorescence de la cellule sous irradiation laser, appelé autofluorescence cellulaire ; l'autre est le marquage artificiel des cellules avec des colorants fluorescents spécifiques, tels que des anticorps monoclonaux marqués avec des colorants fluorescents qui se lient spécifiquement aux antigènes correspondants sur la membrane cellulaire, le cytoplasme et la membrane nucléaire. Ces colorants fluorescents génèrent des signaux par excitation laser. La force du signal de fluorescence reflète le niveau d’expression des antigènes cellulaires. Grâce au signal de fluorescence, nous pouvons analyser les sous-populations et les fonctions cellulaires.

3. Nuage de points (un peu comme la mosaïque que vous avez jouée)

(1) Diagramme de dispersion des cellules sanguines : en utilisant la lumière diffusée vers l'avant (FSC), la lumière diffusée latéralement (SSC), la fluorescence latérale (SFL) et la largeur du signal de lumière diffusée vers l'avant (FSCW), l'analyseur de cellules sanguines affiche les informations sur les cellules via la position et la densité des points de diffusion sur le plan du quadrant. Sur la base des quatre signaux, divers diagrammes de dispersion sont générés pour classer et compter les globules blancs, les globules rouges nucléés, les réticulocytes et les plaquettes, et détecter les cellules anormales et les cellules immatures.

(2) Canal de détection WDF

Grâce à ce canal, nous pouvons distinguer quatre types de sous-types de leucocytes dans le sang périphérique : les lymphocytes, les monocytes, les neutrophiles et les éosinophiles. De plus, nous pouvons obtenir des indices de cellules anormales, ce qui est utile pour un réexamen.

(3) Canal de détection WNR

La fonction principale de ce canal est de distinguer les basophiles.

Enfin, nous avons obtenu les résultats de la classification des globules blancs en cinq catégories, mais si vous rencontrez des messages anormaux, n'oubliez pas de demander un réexamen !

Ok, à la prochaine !