Quelles sont les étapes de la coloration de Gram

Beaucoup de gens ne savent pas ce qu'est la coloration de Gram. Il s'agit d'une méthode de coloration différentielle couramment utilisée en cytologie. Il s'agit d'une méthode de recoloration des cheveux inventée par un médecin danois en 1884. Elle est divisée en quatre étapes : coloration primaire, mordançage, décoloration et recoloration. La plupart des gens ne connaissent pas les étapes de la méthode de coloration de Gram. Je vous la présente ci-dessous. Étapes de la coloration de Gram.

Tout d’abord, quelles sont les étapes de la coloration de Gram ? Étapes de l'opération : Faire des frottis de différentes bactéries cultivées (noter que le frottis ne doit pas être trop épais), sécher et fixer. Lors de la fixation, passez la lame dans la flamme 1 à 2 fois. Ne la surchauffez pas et la lame ne doit pas être trop chaude au toucher.

.Coloration (1) Pour la coloration initiale, ajouter une goutte de violet de cristal dissous dans de l'acide oxalique pendant environ une minute puis laver à l'eau.

(2) Ajoutez une solution d’iode au mordant pour rincer l’eau restante, couvrez pendant environ une minute, puis rincez à l’eau.

3) Décoloration : secouez la lame pour éliminer l'eau et placez-la sur un fond blanc. Lavez-la avec de l'alcool à 95 % jusqu'à ce que l'alcool cesse d'apparaître violet, environ 20 à 30 secondes. Rincez immédiatement l'alcool à l'eau. (4) Recolorer avec une solution de safranine pendant 1 à 2 minutes et rincer à l'eau.

(5) Après séchage, observer au microscope à bain d'huile. Les bactéries Gram-négatives apparaissent en rouge, tandis que les bactéries Gram-positives apparaissent en violet. La réaction de coloration de Gram des bactéries dispersées est utilisée comme norme ; les bactéries trop denses donnent souvent des résultats faussement positifs.

6) En utilisant la même méthode, préparez une lame mixte d’Escherichia coli et de Bacillus subtilis sur une lame de verre pour comparaison de coloration de Gram. La clé de la coloration de Gram est de contrôler strictement le degré de décoloration par l'alcool. Si la décoloration est excessive, les bactéries positives peuvent être colorées par erreur comme des bactéries négatives ; si la décoloration est insuffisante, les bactéries négatives peuvent être colorées par erreur comme des bactéries positives. De plus, l'âge des bactéries influence également les résultats de la coloration. Si les bactéries positives sont cultivées trop longtemps, sont mortes ou se sont dissoutes d'elles-mêmes, une réaction négative est souvent observée.

Deuxièmement, la réaction de coloration de Gram est une caractéristique importante pour la classification et l’identification des bactéries . Elle a été fondée en 1884 par le médecin danois Gr II. La coloration de Gram permet non seulement d'observer la morphologie des bactéries mais également de distinguer toutes les bactéries en deux catégories : celles avec une coloration bleu-violet sont appelées bactéries Gram-positives, représentées par G+ ; celles avec une coloration rouge (couleur de contre-coloration) sont appelées bactéries Gram-négatives, représentées par G-. Les différentes réponses des bactéries à la coloration de Gram sont dues à la composition et à la structure différentes de leurs parois cellulaires.

Les étapes de la méthode de coloration de Gram sont les suivantes : la paroi cellulaire des bactéries Gram-positives est principalement composée d'une structure en réseau formée de peptidoglycane. Au cours du processus de coloration, lorsqu'elle est traitée à l'éthanol, la taille des pores de la structure en réseau devient plus petite en raison de la déshydratation et la perméabilité diminue, de sorte que le complexe cristal violet-iode est retenu dans la cellule et n'est pas facile à décolorer, apparaissant ainsi violet bleuté ; la paroi cellulaire des bactéries Gram-négatives a une faible teneur en peptidoglycane et une teneur élevée en substances lipidiques. Lorsqu'elles sont traitées à l'éthanol, les substances lipidiques se dissolvent et la perméabilité de la paroi cellulaire augmente, ce qui permet au complexe cristal violet-iode d'être facilement extrait par l'éthanol et décoloré, puis coloré avec la couleur du contre-colorant (safranine), apparaissant ainsi en rouge.