Quelles sont les méthodes de détection du clenbutérol

Le clenbutérol était à l’origine utilisé pour traiter l’asthme bronchique, mais ses effets secondaires sur le corps humain sont si graves qu’il a longtemps été interdit dans le monde entier. Cependant, de nombreux marchands de viande l'utilisent dans les aliments pour animaux afin de réduire les coûts. Si les humains consomment de la viande contenant ces résidus pendant une longue période, cela aura des effets néfastes sur le système cardiovasculaire.

Induisant ainsi des tumeurs malignes. Par conséquent, la détection du clenbutérol dans les produits carnés doit être contrôlée à la source. Il existe actuellement plusieurs méthodes de détection :

Chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GC-MS)

L'avantage de la méthode GC-MS est qu'elle combine l'effet de séparation efficace et rapide de la chromatographie avec l'analyse qualitative très sensible de la spectrométrie de masse. Elle peut effectuer une analyse qualitative et quantitative sur un résidu spécifique lorsque plusieurs résidus existent en même temps, et présente une limite de détection plus élevée. Français Fente C. A et al. ont utilisé la GC-MS pour détecter les résidus de CLB dans les poils de bovins, avec une limite de détection minimale de 5 ng/g ; Pteer Batioens a utilisé la chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse en tandem (GC-MS-MS) pour détecter la teneur en CLB dans les tissus de bovins, de moutons et de porcs, avec une limite de détection minimale de 2 ng/g ; Liu Qi et al. ont utilisé la GC-MS (source d'ions EI) pour détecter le CLB dans l'urine de porc, avec une limite de détection de 0,5 ng/mL ; Van Rhijin et al. ont utilisé des dérivés de triméthylsilyle ou de 2-diméthylsilylmorpholine pour détecter le CLB dans les extraits d'urine. Les dérivés ont été scannés à l'aide d'impulsions électriques ou d'une ionisation chimique, ce qui produirait une sensibilité plus élevée. De plus, par rapport à la méthode HPLC, la méthode GC-MS présente une sensibilité de détection plus élevée et un taux de faux positifs plus faible. C'est pourquoi mon pays a légalement établi la GC-MS comme méthode de confirmation pour la détection du CLB (NY/T468~2001).

Chromatographie liquide à haute performance (HPLC)

La HPLC est adaptée à la détermination des β-agonistes thermiquement instables et hautement polaires et de leurs métabolites. De plus, la HPLC peut être combinée avec des systèmes d'extraction pré-colonne, de purification, de réaction de dérivatisation par fluorescence post-colonne et de spectrométrie de masse (MS) pour automatiser facilement le processus d'analyse. Huang Shixin et al. (1995) ont utilisé un détecteur ultraviolet pour détecter les résidus de CLB dans le foie de porc et le porc à λ = 243 nm, colonne chromatographique : shimpack CLC-ODS150 × 6,0 mn, débit : 1 ml/min, température de la colonne : température ambiante 30 ℃, et la limite de détection minimale pourrait atteindre 2 ng/g. Certaines personnes à l’étranger ont utilisé la HPLC (détecteur à barrette de diodes) pour déterminer les résidus de CLB dans les aliments d’origine animale, et la limite de détection minimale était de 1,26 ng/g, avec un taux de récupération de 98,9 %. Actuellement, mon pays utilise la CLHP comme méthode semi-confirmatoire de détection des résidus de CLB, avec une limite de détection minimale comprise entre 1 et 15 ng/g. Ses avantages sont une bonne spécificité, une forte sélectivité, une grande précision de détection et un faible taux de faux positifs ; ses inconvénients sont le long temps de traitement des échantillons, le processus de détection fastidieux et difficile, et la nécessité d'instruments coûteux, qui sont soumis à certaines limitations dans les applications pratiques.

Dosage immuno-enzymatique (ELISA)

En utilisant la liaison spécifique des antigènes et des anticorps immunologiques et l'effet catalytique efficace des enzymes, la peroxydase de raifort végétale (HRP) est combinée au clenbutérol (CL) par une méthode chimique pour former du clenbutérol conjugué à une enzyme. L'anticorps (anticorps IgG anti-lapin de mouton) appliqué sur le support en phase solide est combiné avec l'anticorps spécifique anti-clenbutérol, puis le clenbutérol à tester et le clenbutérol couplé à l'enzyme sont ajoutés. Ils se lient de manière compétitive à l'anticorps clenbutérol. Après lavage, le substrat est ajouté et la quantité de clenbutérol à tester est mesurée en fonction du changement de la substance colorée. S’il y a plus de clenbutérol à tester, il y aura moins de clenbutérol couplé à l’enzyme et la quantité de substance colorée sera moindre. La teneur en clenbutérol de l'échantillon a été déterminée par inspection visuelle ou colorimétrie. La longueur d'onde optimale pour la colorimétrie était de 450 nm et la longueur d'onde de référence devait être supérieure à 600 nm.

Immunochromatographie à l'or colloïdal

En utilisant la technologie d'immunochromatographie à l'or colloïdal compétitif, le Clen dans la solution de test se combine avec l'anticorps marqué à l'or sur le tampon marqué à l'or pour former un complexe. Si la concentration de Clen dans la solution de test est inférieure à la valeur de sensibilité, l'anticorps marqué à l'or non lié s'écoule vers la zone T et est lié par le conjugué Clen-BSA fixé sur la membrane, s'agglomérant progressivement en une ligne T visible ; si la concentration de Clen est supérieure à la valeur de sensibilité, tous les anticorps marqués à l'or forment un complexe et ne se combineront plus avec le conjugué Clen-BSA au niveau de la ligne T pour former une ligne T visible. Le complexe non fixé traverse la zone T et est capturé par l'anticorps secondaire dans la zone C, formant une ligne C visible. L'apparition de la ligne C indique que l'immunochromatographie a eu lieu, ce qui signifie que le papier test est efficace.

Méthode d'essai de pliage

1. Lisez entièrement le manuel d'instructions avant le test et remettez la plaque de réactif et la solution d'échantillon à température ambiante avant utilisation.

2. Ouvrez le sac en aluminium-plastique et sortez le papier test.

3. Procéder selon le modèle (l'urine ne doit pas tremper directement la zone d'observation).

3.1 Plongez l'extrémité blanche du papier test dans l'urine (le niveau du liquide ne doit pas dépasser la ligne horizontale) et gardez-le pendant 5 secondes ;

3.2 Utilisez un compte-gouttes pour absorber l’échantillon d’urine à tester et ajoutez lentement 3 gouttes d’échantillon dans le puits d’échantillon.

4. Posez la bandelette de test à plat pendant 1 minute et attendez que la bande rouge apparaisse.

5. Lisez le résultat dans les 3 à 8 minutes. Le résultat sera invalide après 10 minutes.

6. Les résultats peuvent être obtenus en 10 minutes

Interprétation du résultat du pliage

Positif (+) : Seule une bande violet-rouge apparaît dans la zone de contrôle qualité (C). Aucune bande violet-rouge n’est apparue dans la zone de test (T).

Négatif (-) : Deux bandes violet-rouge apparaissent. L'un est situé dans la zone de test (T) et l'autre est situé dans la zone de contrôle qualité (C).

Non valide : Aucune bande violet-rouge n'apparaît dans la zone de contrôle qualité (C), indiquant que le test a échoué ou que le papier de test est périmé.

Remarque : La bande violet-rouge dans la zone de test (T) peut présenter différentes nuances de couleur. Cependant, dans le temps d'observation prescrit, quelle que soit la profondeur de couleur de la bande, même une bande très faible doit être jugée comme un résultat négatif.

Billets pliants

1. Veuillez utiliser la carte de test une fois pendant la durée de conservation.

2. Évitez la lumière directe du soleil et les ventilateurs électriques pendant les tests.

3. Essayez de ne pas toucher la surface du film blanc au centre de la carte de test.

4. Les compte-gouttes d’échantillons d’urine ne doivent pas être mélangés pour éviter toute contamination croisée.

5. S'il y a des précipitations ou de la turbidité dans l'échantillon d'urine, veuillez le centrifuger avant le test.

Chromatographie liquide-spectrométrie de masse/spectrométrie de masse (HPLC-MS/MS)

Voir SN/T

1924-2007 Méthode de détection des résidus de clenbutérol, de ractopamine, de salbutamol et de terbutaline dans les aliments d'origine animale destinés à l'importation et à l'exportation.

La présente norme s’applique à la détection des résidus de clenbutérol, de ractopamine, de salbutamol et de terbutaline dans les muscles et les viscères des aliments d’origine animale.

Les résidus de médicament dans l'échantillon ont été extraits avec un tampon d'acétate d'ammonium à pH 5,2, et de la β-glucuronidase-aryl thioestérase a été ajoutée pour l'hydrolyse enzymatique. L'extrait a été purifié par des colonnes doubles SPE C18 et SCX et déterminé par chromatographie liquide-spectrométrie de masse et quantifié par la méthode de l'étalon interne.